本试验通过病原菌体外药物敏感试验、人工致病治疗试验探讨治疗仔猪黄痢的有效、安全的中草药复方。?

1材料：
1.1试验仪器：高压灭菌器，生化培养箱，超净工作台，显微镜，冰箱，离心机，常用玻璃器材等。 ?
1.2试验药物：(1)自拟中草药复方：白头翁50g，黄柏40g，秦皮30g，黄连30g，黄芪30g，当归30g，板栗雄花絮50g。(2)黄连解毒汤：黄连30g、黄芩40g、黄柏20g、栀子40g。各味中草药均购于临沂市中草药批发市场。(3)环丙沙星，由山东齐鲁兽药厂生产。?
1.3药敏纸片 (1)西药药敏纸片。青霉素、四环素、链霉素、红霉素、庆大霉素、卡那霉素、环丙沙星、复方磺胺、先锋霉素Ⅴ、氯霉素、氟哌酸、呋喃妥因、氨苄青霉素、羧苄青霉素、痢特灵，由山东农业大学提供（批号060815）。(2)自拟中药复方药敏纸片和黄连解毒汤药敏纸片。由本课题组参照文献介绍的方法自制。?
1.4试验菌株及菌液：为本课题组分离的地方优势型菌株，血清型为 O54。取37 ℃ 16～18 h普通肉汤培养物，用普通肉汤稀释为每毫升5亿个菌，于4℃冰箱保存备用。?
1.5实验动物：3日龄仔猪（杜长大）共计72头，由我院实习基地提供。  

2方法：(1)病原菌体外药敏试验：用消毒棉拭子将试验用菌液均匀涂布在普通琼脂培养基平板上，将抗生素药敏纸片和中药药敏纸片分别贴在培养基表面，置37℃恒温箱中培养24 h，用游标卡尺测量抑菌圈直径。(2)判定试验结果判定标准为：抑菌圈直径小于10mm为耐药；10～15 mm为中度敏感；15 mm以上为高度敏感。(3)人工致病治疗试验：①分组及人工感染。选取6窝3日龄仔猪（母猪未免疫大肠杆菌疫苗），每窝保留12头仔猪，分别记为Ⅰ～Ⅵ组。在每一窝中每2头一组，随机分为A、B、C、D、E、F 6个小组，然后再将它们分别分配到Ⅰ～Ⅵ组，每组12头仔猪。分配到的仔猪体表涂上新母猪的粪尿。6个试验组中，其中Ⅰ组为空白对照组，Ⅱ组为阳性对照组，Ⅲ组为西药组，Ⅳ组为自拟中药组，Ⅴ组为中西医结合组，Ⅵ组为黄连解毒汤组。Ⅰ组每头实验仔猪口服生理盐水0.3 mL，其余各组每只口服试验大肠杆菌菌液0.3 mL；②治疗。人工感染10 h后各组相继发病，各组按预先设计剂量及途径给药，Ⅰ、Ⅱ组均不给药；Ⅲ组发病仔猪肌肉注射本试验菌株的高敏药物环丙沙星（5 mg/kg）；Ⅳ组将上述自拟方剂的各中药混合共研细末，哺乳母猪拌料喂服（上述方药为1头母猪服用量），1日1剂，连用3剂，同时取上述方剂的中药煎水，灌服发病仔猪（上述方药为10头仔猪的灌服量），每日两次，连用3 d；Ⅴ组同时采取Ⅲ组和Ⅳ组措施；Ⅵ组使用黄连解毒汤，方法同Ⅳ组；③试验期间试验组与对照组采取相同的饲养管理措施。搞好卫生：及时清扫粪尿、更换垫草，保持舍内干燥，解决好保温与通风的问题。加强消毒：加强环境消毒，舍内用2%百毒杀每日进行1次带猪消毒。每次哺乳前将母猪的乳房、乳头、腹部等体表用1%高锰酸钾水浸泡的毛巾擦洗消毒；④疗效判定。治愈：下痢消失，粪便形状、颜色、排粪次数恢复正常，精神、食欲恢复正常。有效：下痢减轻，粪便有好转，精神、食欲尚未完全好转。无效：下痢症状无好转或加重，食欲、精神状况无明显改变，病仔猪甚至死亡。数据的显著性检测，发病率、有效率及治愈率均用卡方检验。?

3结果与分析：
(1)体外药敏试验：体外药敏试验表明，治疗本大肠杆菌病的高度敏感药物有环丙沙

星、卡那霉素和痢特灵，中度敏感药物有羧苄青霉素、氯霉素、庆〖JP2〗大霉素和呋喃妥因，对其他药物均不敏感。自拟中药纸片抑菌圈直径为13.7 mm，属中度敏感药物。黄连解毒汤抑菌圈直径为12.7 mm，属中度敏感药物。 (2)人工致病治疗试验 由表1可知，Ⅳ组（自拟中药组）与Ⅰ组（空白对照组）、Ⅱ（阳性对照组）、Ⅵ组（黄连解毒汤组）相比差异显著（P<0.05），与Ⅲ组（环丙沙星组）差异不显著（P>0.05）；说明本自拟中草药复方具有较好的治疗仔猪黄痢效果，优于黄连解毒汤，与高敏抗生素相当。Ⅴ组（环丙沙星+自拟中药）的治疗效果最好，与其他组均差异显著（P<0.05），说明中西医结合治疗的效果较好。
表1人工致病治疗试验结果：
组别                  实验仔猪数      治愈数       治愈率（%）       死亡数      死亡率（%）
Ⅰ(空白对照组)           12             12 *?      －                 0              0
Ⅱ(阳性对照组)           12              1*         －                 11           91.7a
Ⅲ(环丙沙星组)           12             10         83.3a               2            16.7b
Ⅳ(自拟中药组)           12             10         83.3a               2            16.7b
Ⅴ(环丙沙星+自拟中药)    12             11         91.2b               1            8.3c
Ⅵ(黄连解毒汤组)         12             7          58.3c               5            41.7d
注：同一系列标相同字母表示差异不显著，标不同字母表示差异显著,*表示存活数。

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