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猪组织和血浆中金霉素残留分布规律的数学模型分析

发布日期:2013年07月10日 来源:中国养猪第一网

陶琳丽 高士争 葛长荣 杨秀娟 张 曦

摘要试验采用高效液相色谱法检测猪组织(肌肉、肝脏、肾脏)和血浆中的金霉素残留量,通过对饲料中金霉素添加量和组织、血浆中金霉素残留量回归关系不同数学模型的分析,确立残留分布的规律最佳数学模型。饲料中金霉素的添加量在50-150μg/g的范围内饲料添加量与猪组织(肌肉、肾脏、肝脏)、血浆的残留数学模型分别为:y=0.553 5e0.007 2x;y=1.666e0.011 6x;y=4.404 8ln(x)-14.669;y=1.452 7e0.009 2x

关键词 金霉素;残留;数学模型;猪组织

金霉素(Chlortetra6ycline,CTC)是美国氰胺公司于1949年开发的四环素类广谱抗生素,对革兰氏阳性菌、阴性菌、立克次体和大型病毒有广泛的抑制作用。饲料中添加金霉素能有效提高畜禽日增重和饲料转化效率。可有效防治细菌性肠炎、萎缩性鼻炎和猪痢疾,近年来,金霉素被广泛用作抗菌促生长饲料添加剂翻。由于使用不当,如没有按照要求停药期,在动物源食品中的残留也日益突出,人们长期食用这种含有药物残留的动物源食品,会对人类的健康构成潜在的威胁,如导致“四环素牙”,造成肝损伤等。我国对此也采取了相应措施,并制定了金霉素残留的国家标准检测方法(GB/T5009.116—2003),为保证我国人民的健康,为残留监测提供一些依据,本试验通过测定不同饲料添加浓度下猪组织和血浆中金霉素残留量,选择最佳残留分布规律的数学模型.为残留监测提供依据。

1材料与方法

1.1试验动物

选择日龄、体重相近『 (60.0±1.0)kg』,体格健壮的DLY三元杂交(杜洛克×长白×约克)商品猪20头,随机分为4组,每组5头,对照组为基础饲料,未添加金霉素。1组、2组、3组饲料在基础饲料的基础上分别添加50、100、150 mg/kg的金霉素。饲喂期70 d,体重达90 kg屠宰,取肌肉、肝脏、肾脏、血浆作为检测样本。

1.2仪器与药品

高效液相色谱仪(1100LC,美国惠普公司,配紫外检测器),色谱柱(ODSCl8 150 minx4.6 mmx5 1Tim,美国Agilent);离心机(RC25C,RC3C,美国杜邦公司);紫外分光光度计(HP8450,美国惠普公司);电子天平(AG245,瑞士梅特勒公司,感应量0.01 mg);回旋振荡器(HY一5,金坛富华仪器有限公司);真空泵(2XZ一0.5,上海鑫磊真空设备有限公司);旋转蒸发器(RE一52A,上海亚荣生化仪器厂);快速混匀器(XKG6一A,姜堰市新康医疗器械有限公司)。

标准品:金霉素(纯度≥99%,Sigma公司)、甲醇和乙腈(色谱纯,美国Fisher公司)、三氯乙酸(分析纯,天津市风船化学试剂科技有限公司)、EDTANa:(分析纯,天津化学试剂三厂)、草酸(分析纯,天津市风船化学试剂科技有限公司)。

1.3试验部分

1.3.1溶液的配制

准确称取10 mg金霉素标准品,用流动相定溶于10 ml的容量瓶中,使之成为浓度为1 mg/ml的标准储备溶液,并于4℃冰箱保存备用。

标准工作液:取标准储备液配置成系列梯度浓度的标准工作液,用流动相稀释,现用现配。

提取液:0.01 tool/1的草酸与0.01 mol/1的ED—TANa2溶液以1:1的体积比混合。

1.3.2.组织样品的提取与净化

提取:取5.00 9组织,加入2 ml的蒸馏水进行匀浆。将匀浆样品加入50 ml的离心管中,加入20 ml提取溶液、l ml 50%的三氯乙酸,振荡10 rain,超声10min,以3 500 r/min离心20 min,过滤。残渣重复提取一次。合并两次滤液。

净化:C18萃取柱预先用10 ml甲醇活化,再用10 ml水淋洗,将提取滤液过C18萃取柱,使药物吸在C18固相萃取柱上。用20 ml水冲洗,顶空5 min。用4 ml流动相洗脱,洗脱液过0.45μm微孔滤膜,供高效液相色谱仪测定。

1.3.3血浆样品的提取与净化

提取:取l ml血浆加入50 ml的离心管中,加入0.Ol mol/l的草酸20 ml,振荡10 min,超声10 min,过滤。

净化:C18预先用10 ml甲醇活化,再用10 ml水淋洗,将滤液过C18微柱,使药物吸附在C18微柱上。用20 ml水冲洗,顶空5 min。用4 ml流动相洗脱,洗脱液过0.45 μm微孔滤膜,供高效液相色谱测定。

1.3.4组织和血浆样品中的金霉素残留量测定

组织和血浆中的金霉素残留量由HPLC—UVD测定。流动相:乙腈:草酸(0.01 mol/1)=6:4;流动相流速:0.8 ml/min;检测波长:372 nm;进样量:50 μl;柱温:室温。

1.4数据处理

利用生物统计学原理对数据进行分析。所有统计分析均在SPSSl l.0软件中进行。

根据所获试验数据。以饲料中金霉素添加量为横坐标.组织和血浆中金霉素残留量为纵坐标作散点图.根据图形形状绘制散点趋势图,并与生物统计学中已知的回归模型图型相比较。选出与之较为相似的几种图形类型,建立对应的回归方程。若所建立的回归方程为非线性回归方程.则直线化该方程,并对原始数据进行转换(见表l)。利用转化后的直线回归方程对原回归方程进行回归分析,判断其线性关系。若转化后的直线回归方程的线性关系越好。则原非线性回归方程的拟合程度越高.反之则原非线性回归方程拟合程度低。

2结果与分析

应用l.3.4节确立的方法对所采集的样品,包括肌肉、肝脏、肾脏和血浆样品进行检测,确立各组织中的金霉素的残留量,得出数据(见表2)。

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