1标准阳性对照血清的抗体效价与原结果误差大于1个滴度
      4个血凝单位(HAU)抗原配制不准确。4个HAU抗原要现用现配，馄悬液要混匀，配好的抗原室温下放置不得超过4个小时，不可反复冻融。为防止4个HAU抗原配制不准确．在作HI试验前必须做回归试验。在微量反应板的1-4排的1-4孔内各加入50微升PBS液。取已配好的4个HAU抗原混匀液50微升加入反应板的第1孔内混匀后吸取50微升加入第2孔，依次倍比稀释至第4孔，从第4孔内吸取50微升棍匀液弃掉．每孔内加入50微升l％红血球混悬液，震荡混匀，20-25度静置20分钟后观察结果。若1孔、2孔红血球完全凝集，而3孔、4孔不凝集，则说明4个HAU配制准确，否则，需重新测定抗原效价，重新配制4个HAU抗原，并作回归试验，直至结果准确。

    阳性对照血清效价降低。阳性对照血清经反复冻融、长期保存或保存不当．会使抗体效价降低。因此，阳性对照血清不可反复冻融，若要长期保存必须保存在-15度以下，不得超过保质期．冷藏保存不得超过4天。

2结果出现慢

    在环境温度20—25度，经过15-30分钟即可读出抗原效价和血清抗体滴度。当温度过低，如低于15度时，出现结果就要慢，往往需要超过40分钟才能出现清晰的结果。因此，为了在较短的时间内出现结果，应将试验中的环境温度控制在20-25度。

3泪滴状流淌(完全血凝抑制)线细

    一般是由于环境温度低，或是反应作用时间短，结果还没有完全显示。需静置一段时间，读数。

4结果出现快，并且整板无凝集现象

    试验过程中的环境温度超过30度时，试验结果出现的要快．往往在15分钟左右就可读数。一旦时间过长，结果就会消失，使整板无凝集现象，给人一种误以为效价为O，或抗体滴度为12log2。要求试验环境温度不得超过30度，反应15—30分钟及时读数，不可长时间拖延读数时间。

5整板无血细胞凝集现象

    当试验环境在20-25度，经15—30分钟读数时，整板无红细胞凝集现象，有如下4种可能。8份血清的抗体滴度为12log2；试验过程中全板少了加4个HAU抗原的步骤；4个HAU抗原已经失效；环境温度过高，读数时间拖延。

    当整板无红细胞凝集现象时，要先查明原因。可用微量移液器吸取每孔内的混悬液，当每孔内的馄悬液容量为50微升x3时，可能是前3种原因；每孔内的混悬液容量为50微升x2时，则是第2种原因。无论哪种原因引起的全板无凝集现象，都须进行重新测。由第3种原因引起的，要重新配制4个HAU抗原。并注意操作过程中要专心，随时检查是否漏掉某些步骤，控制好试验过程中的环境温度，及时看结果。

6 8份被检样品结果全为Iog2

    当8份被检样品全是第1孔完全血凝抑制，而2-12孔无凝集。用移液器吸取第1孔内容量为50微升x4，而2—12孔容量为50微升x 3。此种情况一般发生在8道微量移液器操作时，遗漏了将被捡样品逐孔倍比稀释，使第1孔内抗体含量高，完全抑制了抗原凝集红细胞的能力，而出现完全血凝抑制；2-12孔内引无抗体，只有抗原，导致2-12孔全部红细胞凝集。也可能是8份被检血清的抗体滴度全为1log2，但此种情况极少出现。因此，要分析原因，进行复检。

    加入1％红细胞的混悬液始终为暗红色，既无红细胞凝集现象，也无血凝抑制现象，一般是1％红细胞混悬液溶血。要求采血、配制1%红细胞时，尽量减少细菌污染。采集血液时要尽量采集至少3只SPF公鸡或无禽流感、新城疫等抗体的健康公鸡血与等量阿氏液(葡萄糖2．05克、柠檬酸钠0．8克、柠檬酸0．055克、氯化钠0．42克，加纯化水至100毫升，散热溶解后调pH值至6．1，69千帕15分钟高压灭菌，4度保存备用)混合，或按1／10比例加入灭菌的3．8％—4．O％的柠檬酸酸钠混匀以防血液凝固。用灭菌的生理盐水或pH值7．2、0．01摩尔／升的PBS液洗3次。若要长时间保存，可将洗涤好的盛有红细胞的试管内加人多量无菌阿氏液压底，4度保存，至少可保存1星期。

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