猪流感(Swine influenza!SI)是由猪流感 病毒(SIV)引起的一种急性高度接触传染性的群发性 呼吸道疾病!其特征为突发咳嗽#呼吸困难#发热#衰竭及迅速康复!猪不分年龄#品种和性别均能感染!是规模化猪场普遍存在难以根治的群发性疾病之一$ 1病毒特性猪流感病毒属于正粘病毒科(0rthomyxoviridae)!甲型流感病毒属(Influenza virus A)!典型病毒粒子呈球状!直径为 80 nm~120 nm$病毒存在于病猪或带毒猪的鼻液或气管%支气管渗出液以及肺和肺淋巴结内!在鸡胚尿囊腔#羊膜腔中及 MDCK#Vero细胞系均能良好增殖&研究表明!猪流感在鸡胚增殖的敏感性远大于MDCK细胞!差异极显著!故常用鸡胚接种进行病毒分离&同时!MDCK与Vero细胞系比较!MDCK细胞的敏感性大于Vero细胞!病毒增殖也较快!这为流感病毒在哺乳动物细胞系培养生产疫苗创造了条件[1!2&] 2猪流感的基因组结构猪流感病毒属单股负链RNA病毒!基因组约为13.6 kb! 由大小不等的8个独立片段组成&8个基因片段编码10个基因产物!其中片段1!3分别编码PB2%PB1和PB3聚合酶!片段4和片段6分别编码血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)!片段5 编码核蛋白(NP)!片段7编码病毒基质蛋白Ml和离子通道蛋白M2!片段8编码非结构蛋白NSl!NS2&8个基因片段的3’ 末端和5’末端都有保守的核苷酸序列!5’末端13个核苷酸序列是3’-GGAACAAAGAUGAppp-5’!3’末端的12个核苷酸序列是3’-OH-UCGU(C)UUUCGUCC-5’!这些序列的内部互补性对体内体外的最佳转录是至关重要的&另外这些末端序列也是激活流感病毒多聚酶活性!切下宿主成熟mRNA帽子结构形成病毒前体mRNA上所必需& 3猪流感基因编码蛋白 HA蛋白是病毒主要的糖蛋白!也是流感病毒主要的表面抗原!能够结合细胞表面受体!利于病毒穿膜!并能诱导中和抗体产生!产生免疫保护作用&HA分子量为75 Ku!约由562~566个氨基酸残基组成&这些残基包含信号肽%HAl和HA2部分!HAl和HA2两部分之间由一个精氨酸连接&HA产生后到其发挥作用时!还经过几个切割加工过程!包括N端信号肽的切除及HAl和HA2的产生!这是病毒进入细胞体内进行复制的前提&信号肽识别内质网膜!HA合成后信号肽就被切除!同时!HA也被切割成HAl和HA2&切割时去掉一个或多个氨基酸残基!这与宿主细胞及毒株的毒力有关&HA单体由呈球状的头部和柄两部分构成!以三聚体的形式镶嵌在双层类脂膜上& NA是构成病毒囊膜纤突的另一个重要蛋白成分!呈哑铃状!以四聚体形式存在&NA由453个氨基酸组成!作用是水解细胞表面的特异性糖蛋白末端的N"乙酰基神经氨酸!避免病毒粒子的聚集!利于病毒释放!对病毒在感染细胞周围的扩散能力有很大影响&它的一级结构包括氨基端胞浆尾%非极性跨膜区%茎部和头部共4个结构域&NA 酶活性的催化中心位于头部顶端!呈凹陷状!每个NA单体都有一个!所以NA纤突具有4个催化中心& 3.3核蛋白(NP)NP是一种单体磷酸化的多肽!是构成病毒核衣壳的主要成分&NP分子量约60 Ku!约有500个氨基酸! 具体特异性!是流感病毒诊断最具代表性的蛋白&倪建强等3[] 利用含组氨酸标签的pET30原核表达系统!表达纯化出NP 蛋白作为诊断抗原!其特异性高&NP至少有3个互相重叠的抗原区!其中一个区在各株流感病毒间均存在!针对这一区的单克隆抗体可抑制病毒RNA的转录& ??????(Polymerase)由PB1% PB2和PB3组成!其分子量分别为96 Ku%87 Ku和85 Ku3个聚合酶与NP蛋白和病毒RNA相连接!构成病毒特异性的聚合酶蛋白复合体!具有转录和核酸内切酶的活性&它们的氨基酸序列上都含有一特异的亲核序列区!以便使这3种蛋白质在胞浆合成后能顺利进入细胞核&PB1的功能是在病毒 mRNA合成开始后催化新合成的延伸反应(PB2的功能是识别并切割宿主细胞的mRNA帽状结构以产生用于病毒RNA 转录的引物"PB3在病毒RNA合成过程中的作用尚不清楚! 可能是一种蛋白激酶或解旋蛋白 M1和M2属于非糖基化蛋白! 富含精氨酸!分别由252个和97个氨基酸组成"M1是维持病毒形态的结构蛋白!具特异性!其抗原性的差异也是流感病毒分型依据之一"M2是一种跨膜蛋白!以四聚体形式存在于感染细胞的细胞膜上!起质子通道作用!能使M1膜打开!病毒 RNP进入胞浆"  (Nonstructural Protei ns!NS)!NSl与NS2相互间有70个氨基酸重叠!分别由不同的 mRNA翻译"NSl在细胞核内合成并积聚!NS2主要在胞浆中! 它们分别在早期感染和晚期感染存在"NS蛋白的N末端含一个典型的细胞核定位信号(NES)!被认为在病毒vRNP向细胞核外转运的过程中发挥作用"Neumann等4[]!发现当细胞感染了缺少NS2蛋白的病毒或病毒NS2位点发生改变时!vRNP 复合体滞留在细胞核内不能向胞内转运" 4猪流感病毒的变异诱发猪流感病毒发生变异的主要机理有$%1&抗原漂移 (antigenic drift)$基因组自发的点突变引起小幅度的变异!积累到一定程度或正好使抗原决定簇发生改变"%2&抗原转变 (genetic shift)$两种不同亚型病毒感染同一宿主细胞!两者的基因片段发生遗传重组"%3&RNA重组(RNArecombination)"%4& 缺损性病毒颗粒的产生" 在单克隆抗体和自然免疫应答的选择压力下!SlV各节段发生了不同程度的遗传进化"1930年分离的第一株猪流感病毒HA基因漂移发生率估计在每年0.4%!0.48%[5]"M1#M2 基因的变异率相对较慢!M2基因变异较M1快!将 A/Sw/Quebec/5393/91与A/Sw/Quebec/192/81流感株比较发现!M1蛋白的变异率约为0.08"!M2蛋白的变异率约为 0.51%6[]"猪流感病毒H1N1的NP基因以每年3.41个核苷酸发生改变!对应的是每年0.34个氨基酸发生改变7[]" 猪上皮细胞表面同时存在唾液酸-a-2!6半乳糖苷 (SAa-2!6-Gal)和SAa-2!3-Gal受体位点!因此猪能够同时感染人流感病毒和禽流感病毒"当2个或2个以上流感病毒同时感染一个猪体细胞时!在增殖过程中不同病毒的基因组片段可以随机重新组合!产生新的流感病毒亚型8[]"Karasin等9[] 系统分析印地安那州H1N2亚型发现是由古典H1型和美国 1998年出现的H3N2基因重组的结果"Webby等[10]发现美国分离株H1N2是由H1N1的HA基因和H3N2的另外7个基因重组的结果"同时发现!不含HA基因的H1N2与H3N2的相似程度高于Karasin报道的H1N2!这也说明各个H1N2重组株有其独立的重组过程"Marozin等1[1]比较欧洲的H1N1# H1N2和H3N2型SIV发现!各个基因型间发生了基因交换" 同时发现1999年法国分离猪源H3N2在抗原性上与 A/Sydney/5/19相关性很高!这揭示了猪与人的的病毒之间发生了抗原转变" 国内从山东猪分离出H9N2流感病毒!分析可能是由鸡和鸭流感病毒重组的结果1[2]"继H9N2亚型流感病毒1998年首次从猪群中分离到!李海燕等[13]部分序列分析发现猪源 H9N2亚型与国内分离的禽流感病毒高度同源!从血清学和病毒学证明了H9N2亚型病毒在我国猪群中存在" 5猪流感病毒的疫苗研制当前!猪流感病毒疫苗的使用主要还是灭活疫苗!随着分子生物学的发展!促进了基因工程和蛋白质工程 技术的建立! 运用此类技术对疫苗进行了多方面的研究" 猪流感病毒活载体疫苗是将表面抗原HA和#或NA基因克隆到病毒活载体上!表达融合蛋白用于免疫"HA蛋白因其良好的免疫原性使其成为基因工程疫苗的首选!HA诱导产生的体液免疫应答和中和抗体所提供的有效保护力大于NA"Tang等1[4]将猪H3N2型流感 HA基因克隆进腺病毒构建重组体疫苗(rAd-HA)!接种小鼠后能够部分保护人流感病毒A/HK/1/68(H3N2)的攻击"Ronald等1[5] 构建了表达猪H3N2型流感HA基因腺病毒重组体!将其接种三周龄 仔猪!四周后!接种HA重组体的猪产生高水平的血凝抗体"在其它病毒载体的探索上!国内成功地在杆状病毒系统中表达了SIVA/Swine/HeNan/703/2001(H3N2)NA基因!Western $%&’和神经氨酸酶活性检测结果显示!表达产物具有良好的免疫原性和神经氨酸酶活性1[6]"同时H3亚型猪流感病毒HA基因重组伪狂犬病毒载体也获得成功[17]" 近年来!国外学者尝试将M2蛋白(M2e)作为免疫原研制疫苗"2002年!heinen等1[8]构建了表达M2e的DNA疫苗!产生的抗体不能中和病毒!感染H1N1后!不能对猪提供保护力! 同时促进猪出现严重的临床症状"这与heinen等1[92]001年提出的M2e产生抗体的增强作用利于机体保护的观点不一致" 猪感染病毒后!细胞膜表面表达M2e!接合M2的抗体通过细胞寻靶促进感染细胞死亡!但由于产生抗体不具病毒中和能力!当病毒感染量太高!就不能对机体提供有效保护"事实表明!将M2蛋白作为免疫抗原还需要进一步探讨" 与灭活疫苗相比!流感减毒活疫苗对流感能够提供更持久的保护!同时!活疫苗能够诱导局部和全身性的综合性抗体以及CMI(细胞免疫)"近年来!反向遗传学开始应用于流感病毒的研制!反向遗传操作技术是指通过构建RNA病毒的感染性分子克隆!在病毒cDNA分子水平上对其进行体外人工操作"该技术在人流感弱毒疫苗的开发获得成功!1999年!Fodor等2[0]首次通过12质粒系统拯救出流感病毒!其中8个含人源pol I启动子和丁型肝炎病毒核酶序列调控的转录质粒(transcription plasmid)分别克隆出8条流感vRNA!另4个表达质粒pGT表达出PBl!PB2!PA和NP 蛋白’2000年Hoffman等[21]在此基础上进行改进!通过8个质粒共转染!成功地拯救出流感病毒!主要方法是构建含有pol I-poi II双启动子的质粒载体!在pol I启动子与终止子间插入 pol II启动子0和多聚腺苷酸!再将病毒基因插入该系统!利用细胞酶系统拯救出流感病毒’也有报道构建出流感病毒弱毒苗!其中HA和NA基因来自H5N1!其余基因来自H1N1" 质粒系统拯救流感病毒的成功!表明可以在拯救株上引入多个变异位点!减弱毒株活性!研制出安生性更好的弱毒疫苗" 迄今为止!国内外均没有成功拯救出SIV的报道!但该技术对人流感病毒的成功拯救!表明反向遗传技术是猪流感弱毒疫苗研制的方向"但是!反向遗传技术研制弱毒苗仍然存在基因突变的可能性!因而在通向制备弱毒苗的道路上仍有很多问题亟待解决! 研究人员尝试将NP蛋白作为流感基因工程疫苗的添加成份来加强免疫"Ronald等1[5]构建的表达NP蛋白的腺病毒重组体能减少SIV的复制"同时促进流感病毒的消除!heinen等[18]构建表达M2#NP蛋白的疫苗能产生针对NP蛋白的淋巴组织增生"并且机体产生体液免疫的同时有细胞免疫!这可能由于NP蛋白上存在保守的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位和交叉保护抗原表位"能够刺激机体产生非特异性的细胞免疫!Larsen等2[2]把含有白介素6 (interleuki n-6)作为佐剂的HA DNA疫苗免疫猪"发现能够刺激体液免疫的产生"但不能显著地增强猪的免疫反应! Haneberg等2[3]在流感病毒灭活疫苗中混入霍乱毒素或一种 细菌微粒可促进淋巴组织介导的免疫反应"提高疫苗对机体的保护力!Hilgers等2[4]利用磺猪流感病毒分子生物学研究进展吴华!郭万柱* (四川农业大学动物生物技术中心!四川雅安625014) 中图分类号"S852.65+9.5文献标识码"A文章编号"1008-0589(2006)02-0238-03 猪流感(Swine influenza!SI)是由猪流感病毒(SIV)引起的一种急性高度接触传染性的群发性呼吸道疾病!其特征为突发咳嗽#呼吸困难#发热#衰竭及迅速康复!猪不分年龄#品种和性别均能感染!是规模化猪场普遍存在难以根治的群发性疾病之一$ 1病毒特性猪流感病毒属于正粘病毒科(0rthomyxoviridae)!甲型流感病毒属(Influenza virus A)!典型病毒粒子呈球状!直径为 80 nm~120 nm$病毒存在于病猪或带毒猪的鼻液或气管%支气管渗出液以及肺和肺淋巴结内!在鸡胚尿囊腔#羊膜腔中及 MDCK#Vero细胞系均能良好增殖&研究表明!猪流感在鸡胚增殖的敏感性远大于MDCK细胞!差异极显著!故常用鸡胚接种进行病毒分离&同时!MDCK与Vero细胞系比较!MDCK细胞的敏感性大于Vero细胞!病毒增殖也较快!这为流感病毒在哺乳动物细胞系培养生产疫苗创造了条件[1!2&] 2猪流感的基因组结构猪流感病毒属单股负链RNA病毒!基因组约为13.6 kb! 由大小不等的8个独立片段组成&8个基因片段编码10个基因产物!其中片段1!3分别编码PB2%PB1和PB3聚合酶!片段4和片段6分别编码血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)!片段5 编码核蛋白(NP)!片段7编码病毒基质蛋白Ml和离子通道蛋白M2!片段8编码非结构蛋白NSl!NS2&8个基因片段的3’ 末端和5’末端都有保守的核苷酸序列!5’末端13个核苷酸序列是3’-GGAACAAAGAUGAppp-5’!3’末端的12个核苷酸序列是3’-OH-UCGU(C)UUUCGUCC-5’!这些序列的内部互补性对体内体外的最佳转录是至关重要的&另外这些末端序列也是激活流感病毒多聚酶活性!切下宿主成熟mRNA帽子结构形成病毒前体mRNA上所必需& 3猪流感基因编码蛋白 HA蛋白是病毒主要的糖蛋白!也是流感病毒主要的表面抗原!能够结合细胞表面受体!利于病毒穿膜!并能诱导中和抗体产生!产生免疫保护作用&HA分子量为75 Ku!约由562~566个氨基酸残基组成&这些残基包含信号肽%HAl和HA2部分!HAl和HA2两部分之间由一个精氨酸连接&HA产生后到其发挥作用时!还经过几个切割加工过程!包括N端信号肽的切除及HAl和HA2的产生!这是病毒进入细胞体内进行复制的前提&信号肽识别内质网膜!HA合成后信号肽就被切除!同时!HA也被切割成HAl和HA2&切割时去掉一个或多个氨基酸残基!这与宿主细胞及毒株的毒力有关&HA单体由呈球状的头部和柄两部分构成!以三聚体的形式镶嵌在双层类脂膜上& NA是构成病毒囊膜纤突的另一个重要蛋白成分!呈哑铃状!以四聚体形式存在&NA由453个氨基酸组成!作用是水解细胞表面的特异性糖蛋白末端的N"乙酰基神经氨酸!避免病毒粒子的聚集!利于病毒释放!对病毒在感染细胞周围的扩散能力有很大影响&它的一级结构包括氨基端胞浆尾%非极性跨膜区%茎部和头部共4个结构域&NA 酶活性的催化中心位于头部顶端!呈凹陷状!每个NA单体都有一个!所以NA纤突具有4个催化中心& 3.3核蛋白(NP)NP是一种单体磷酸化的多肽!是构成病毒核衣壳的主要成分&NP分子量约60 Ku!约有500个氨基酸! 具体特异性!是流感病毒诊断最具代表性的蛋白&倪建强等3[] 利用含组氨酸标签的pET30原核表达系统!表达纯化出NP 蛋白作为诊断抗原!其特异性高&NP至少有3个互相重叠的抗原区!其中一个区在各株流感病毒间均存在!针对这一区的单克隆抗体可抑制病毒RNA的转录& ??????(Polymerase)由PB1% PB2和PB3组成!其分子量分别为96 Ku%87 Ku和85 Ku3个聚合酶与NP蛋白和病毒RNA相连接!构成病毒特异性的聚合酶蛋白复合体!具有转录和核酸内切酶的活性&它们的氨基酸序列上都含有一特异的亲核序列区!以便使这3种蛋白质在胞浆合成后能顺利进入细胞核&PB1的功能是在病毒 mRNA合成开始后催化新合成的延伸反应(PB2的功能是识别并切割宿主细胞的mRNA帽状结构以产生用于病毒RNA 转录的引物"PB3在病毒RNA合成过程中的作用尚不清楚! 可能是一种蛋白激酶或解旋蛋白M1和M2属于非糖基化蛋白! 富含精氨酸!分别由252个和97个氨基酸组成"M1是维持病毒形态的结构蛋白!具特异性!其抗原性的差异也是流感病毒分型依据之一"M2是一种跨膜蛋白!以四聚体形式存在于感染细胞的细胞膜上!起质子通道作用!能使M1膜打开!病毒 RNP进入胞浆"(Nonstructural Protei ns!NS)!NSl与NS2相互间有70个氨基酸重叠!分别由不同的 mRNA翻译"NSl在细胞核内合成并积聚!NS2主要在胞浆中! 它们分别在早期感染和晚期感染存在"NS蛋白的N末端含一个典型的细胞核定位信号(NES)!被认为在病毒vRNP向细胞核外转运的过程中发挥作用"Neumann等4[]!发现当细胞感染了缺少NS2蛋白的病毒或病毒NS2位点发生改变时!vRNP 复合体滞留在细胞核内不能向胞内转运" 4猪流感病毒的变异诱发猪流感病毒发生变异的主要机理有$%1&抗原漂移 (antigenic drift)$基因组自发的点突变引起小幅度的变异!积累到一定程度或正好使抗原决定簇发生改变"%2&抗原转变 (genetic shift)$两种不同亚型病毒感染同一宿主细胞!两者的基因片段发生遗传重组"%3&RNA重组(RNArecombination)"%4& 缺损性病毒颗粒的产生" 在单克隆抗体和自然免疫应答的选择压力下!SlV各节段发生了不同程度的遗传进化"1930年分离的第一株猪流感病毒HA基因漂移发生率估计在每年0.4%!0.48%[5]"M1#M2 基因的变异率相对较慢!M2基因变异较M1快!将 A/Sw/Quebec/5393/91与A/Sw/Quebec/192/81流感株比较发现!M1蛋白的变异率约为0.08"!M2蛋白的变异率约为 0.51%6[]"猪流感病毒H1N1的NP基因以每年3.41个核苷酸发生改变!对应的是每年0.34个氨基酸发生改变7[]" 猪上皮细胞表面同时存在唾液酸-a-2!6半乳糖苷 (SAa-2!6-Gal)和SAa-2!3-Gal受体位点!因此猪能够同时感染人流感病毒和禽流感病毒"当2个或2个以上流感病毒同时感染一个猪体细胞时!在增殖过程中不同病毒的基因组片段可以随机重新组合!产生新的流感病毒亚型8[]"Karasin等9[] 系统分析印地安那州H1N2亚型发现是由古典H1型和美国 1998年出现的H3N2基因重组的结果"Webby等[10]发现美国分离株H1N2是由H1N1的HA基因和H3N2的另外7个基因重组的结果"同时发现!不含HA基因的H1N2与H3N2的相似程度高于Karasin报道的H1N2!这也说明各个H1N2重组株有其独立的重组过程"Marozin等1[1]比较欧洲的H1N1# H1N2和H3N2型SIV发现!各个基因型间发生了基因交换" 同时发现1999年法国分离猪源H3N2在抗原性上与 A/Sydney/5/19相关性很高!这揭示了猪与人的的病毒之间发生了抗原转变" 国内从山东猪分离出H9N2流感病毒!分析可能是由鸡和鸭流感病毒重组的结果1[2]"继H9N2亚型流感病毒1998年首次从猪群中分离到!李海燕等[13]部分序列分析发现猪源 H9N2亚型与国内分离的禽流感病毒高度同源!从血清学和病毒学证明了H9N2亚型病毒在我国猪群中存在" 5猪流感病毒的疫苗研制当前!猪流感病毒疫苗的使用主要还是灭活疫苗!随着分子生物学的发展!促进了基因工程和蛋白质工程技术的建立! 运用此类技术对疫苗进行了多方面的研究" 猪流感病毒活载体疫苗是将表面抗原HA和#或NA基因克隆到病毒活载体上!表达融合蛋白用于免疫"HA蛋白因其良好的免疫原性使其成为基因工程疫苗的首选!HA诱导产生的体液免疫应答和中和抗体所提供的有效保护力大于NA"Tang等1[4]将猪H3N2型流感 HA基因克隆进腺病毒构建重组体疫苗(rAd-HA)!接种小鼠后能够部分保护人流感病毒A/HK/1/68(H3N2)的攻击"Ronald等1[5] 构建了表达猪H3N2型流感HA基因腺病毒重组体!将其接种三周龄仔猪!四周后!接种HA重组体的猪产生高水平的血凝抗体"在其它病毒载体的探索上!国内成功地在杆状病毒系统中表达了SIVA/Swine/HeNan/703/2001(H3N2)NA基因!Western $%&’和神经氨酸酶活性检测结果显示!表达产物具有良好的免疫原性和神经氨酸酶活性1[6]"同时H3亚型猪流感病毒HA基因重组伪狂犬病毒载体也获得成功[17]" 近年来!国外学者尝试将M2蛋白(M2e)作为免疫原研制疫苗"2002年!heinen等1[8]构建了表达M2e的DNA疫苗!产生的抗体不能中和病毒!感染H1N1后!不能对猪提供保护力! 同时促进猪出现严重的临床症状"这与heinen等1[92]001年提出的M2e产生抗体的增强作用利于机体保护的观点不一致" 猪感染病毒后!细胞膜表面表达M2e!接合M2的抗体通过细胞寻靶促进感染细胞死亡!但由于产生抗体不具病毒中和能力!当病毒感染量太高!就不能对机体提供有效保护"事实表明!将M2蛋白作为免疫抗原还需要进一步探讨" 与灭活疫苗相比!流感减毒活疫苗对流感能够提供更持久的保护!同时!活疫苗能够诱导局部和全身性的综合性抗体以及CMI(细胞免疫)"近年来!反向遗传学开始应用于流感病毒的研制!反向遗传操作技术是指通过构建RNA病毒的感染性分子克隆!在病毒cDNA分子水平上对其进行体外人工操作"该技术在人流感弱毒疫苗的开发获得成功!1999年!Fodor等2[0]首次通过12质粒系统拯救出流感病毒!其中8个含人源pol I启动子和丁型肝炎病毒核酶序列调控的转录质粒(transcription plasmid)分别克隆出8条流感vRNA!另4个表达质粒pGT表达出PBl!PB2!PA和NP 蛋白’2000年Hoffman等[21]在此基础上进行改进!通过8个质粒共转染!成功地拯救出流感病毒!主要方法是构建含有pol I-poi II双启动子的质粒载体!在pol I启动子与终止子间插入 pol II启动子0和多聚腺苷酸!再将病毒基因插入该系统!利用细胞酶系统拯救出流感病毒’也有报道构建出流感病毒弱毒苗!其中HA和NA基因来自H5N1!其余基因来自H1N1" 质粒系统拯救流感病毒的成功!表明可以在拯救株上引入多个变异位点!减弱毒株活性!研制出安生性更好的弱毒疫苗" 迄今为止!国内外均没有成功拯救出SIV的报道!但该技术对人流感病毒的成功拯救!表明反向遗传技术是猪流感弱毒疫苗研制的方向"但是!反向遗传技术研制弱毒苗仍然存在基因突变的可能性!因而在通向制备弱毒苗的道路上仍有很多问题亟待解决! 研究人员尝试将NP蛋白作为流感基因工程疫苗的添加成份来加强免疫"Ronald等1[5]构建的表达NP蛋白的腺病毒重组体能减少SIV的复制"同时促进流感病毒的消除!heinen等[18]构建表达M2#NP蛋白的疫苗能产生针对NP蛋白的淋巴组织增生"并且机体产生体液免疫的同时有细胞免疫!这可能由于NP蛋白上存在保守的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位和交叉保护抗原表位"能够刺激机体产生非特异性的细胞免疫!Larsen等2[2]把含有白介素6 (interleuki n-6)作为佐剂的HA DNA疫苗免疫猪"发现能够刺激体液免疫的产生"但不能显著地增强猪的免疫反应! Haneberg等2[3]在流感病毒灭活疫苗中混入霍乱毒素或一种细菌微粒可促进淋巴组织介导的免疫反应"提高疫苗对机体的保护力!Hilgers等2[4]利用磺基脂多糖(SLP)构成的SLP/S/W复合物作为佐剂和灭活流感疫苗共同免疫猪"能很好地刺激猪体产生体液免疫"其免疫效力强于单纯的水包油乳剂! 6结语猪流感的暴发和流行"对养殖业造成巨大的损失"同时" 因猪流感能够感染人"其公共卫生意义重大!对猪流感分子生物学#变异和免疫机制的进一步研究"将为基因工程疫苗的研制及猪流感控制起到很好的作用! 参考文献: 基脂多糖(SLP)构成的SLP/S/W复合物作为佐剂和灭活流感疫苗共同免疫猪"能很好地刺激猪体产生体液免疫"其免疫效力强于单纯的水包油乳剂! 6结语猪流感的暴发和流行"对养殖业造成巨大的损失"同时" 因猪流感能够感染人"其公共卫生意义重大!对猪流感分子生物学#变异和免疫机制的进一步研究"将为基因工程疫苗的研制及猪流感控制起到很好的作用!

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