2004年2~3月份,某猪场出现有阴唇红肿、乳房隆起等症状的育肥猪和屡配不孕的种猪,经综合诊断为猪玉米赤霉烯酮中毒,现报告如下。
1、发病情况调查该猪场有2~3月龄的杜×长×大三元杂交育肥猪165头,20~25日龄的未断奶三元杂交仔猪81头,长×大二元杂交后备母猪5头、断乳母猪12头、哺乳母猪10头,杜洛克公猪2头。从2月~3月中旬,约55%的育肥猪(90头)出现阴唇红肿、乳房隆起的症状;后备母猪频现发情症状,但只有2头配上种,其余3头1个多月仍未配上;断乳母猪发情延迟,1个多月仅配上5头,其余7头1个多月仍未配上;屡配不孕的母猪占可配种母猪总数的58.8%(10/17).据畜主估算,与往年同期相比,这至少导致少产50头仔猪。发病后,在育肥猪饲料中加过抗菌素、多种维生素和制霉菌素,但疗效不明显。种猪在配种前1~2月内、仔猪在断奶后均注射过正规生物药厂生产的猪伪狂犬病、猪细小病毒病、猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗和猪瘟弱毒疫苗等。起初怀疑疫苗质量问题,电话询问使用同批疫苗的另一个养猪专业户,该专业户反应其养的大小猪外观均正常,主要差别是使用的饲料来源不同。经查,由于当时玉米价高且收购紧张,郑州某猪场自1月20日以来转用了来自某饲料厂的玉米及其浓缩猪料,换用该厂饲料前,该场所有猪均未见类似异常情况。与饲料厂商联系后,随访附近使用该厂混合料的一个养猪户,其饲养的育肥猪也发生上述同类症状,因而怀疑饲料问题。
2、 临床症状所有病猪体况、体温未见明显变化,没有死亡。育肥猪除精神轻度兴奋、食欲轻度下降外,主要表现泌尿生殖器官的发情样症状。性未成熟的中、小母猪阴唇红肿,色鲜红,外翻;乳房隆起,乳头肿大、发红;少数猪的红肿阴唇擦破,使猪圈墙上和猪体上留有血迹。部分未断奶的小母猪也出现阴唇红肿。去势中、小公猪包皮肿大,乳房隆起,乳头肿大;未去势小公猪阴茎包皮肿大明显,还常爬跨其它猪。有8头后备母猪频现发情症状,却多次配种不孕;10头断乳母猪发情期延迟或发情不明显,其中7头多次配种不孕,3头出现假孕,给这些母猪注射雌性激素疗效不明显;有2头妊娠1个月的母猪出现流产、死胎。哺乳母猪外观、泌乳基本正常。2头种公猪性欲降低,多次自然交配前注射过丙酸睾酮雄性激素。
3 、饲料检验3.1 感观检查畜主和作者均怀疑饲料问题,先检查饲料。该猪场购买的玉米直接堆放在新盖平房的水泥地面上,开包检查,闻有霉味,发现有的玉米粒表面长有白色绵丝状物;粉碎的剩余玉米也有霉味。
3.2 病原分离培养取玉米粒和混合饲料样,0.1%升汞消毒1min,无菌蒸馏水冲洗,然后将样品分别无菌接种于加有抗菌素的卡贝克(czapek)琼脂培养基平皿各5个,另设3个无菌蒸馏水对照培养基平皿,25~28℃培养72h.接样培养基都长有白色绒丝状物,取培养物涂片,乳酸酚棉蓝染色镜检,见有分隔菌丝和孢子,大分生孢子呈镰刀状、中间有2~5个隔,小分生孢子多为卵圆形细胞;而对照培养基平皿均未见类似菌落。
3.3 毒素检测随机抽取玉米样和混合饲料样,玉米赤霉烯酮毒素提取和气相色谱测定参考文献(陈必芳等,1994)的方法进行。测得玉米样和混合饲料样中玉米赤霉烯酮的含量分别为2.51mg/kg和1.85mg/kg.挑取上述病原分离培养物,以pH8.0的PBS液稀释,用0.3μm滤膜过滤除菌,将少量过滤液接种到长成单层的PK15细胞上,36h后,细胞质浓缩、颗粒化,核浓缩、碎裂、液化,细胞呈中毒样病变;而未接种过滤液的细胞生长正常。根据发病情况、临床症状、实验室检查,初步诊断为镰刀菌引起的猪玉米赤霉烯酮中毒。
4 、处理措施立即停用有问题的玉米及其混合料,换用优质玉米配制的新鲜饲料,在饲料中多加1倍的VC、VE、VA,并补喂一些青绿饲料,如此连续7d,症状显著减轻。15d后随访,育肥猪痊愈,种猪繁殖性能恢复正常,没有出现新的病例。
5、 小结与讨论综合发病情况调查、临床症状、实验室检查和处理结果,诊断为镰刀菌引起的猪玉米赤霉烯酮中毒。镰刀菌是一种所谓的“田间真菌”,它的适宜生长温度一般在20~22℃、相对湿度在80%~90%,另有些镰刀菌在10℃低温及低水分条件下仍可生长。玉米、小麦等粮食与饲料在田间和储存过程中均容易受到镰刀菌的污染,并产生玉米赤霉烯酮(ZEN)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)和T-2毒素等;据调查,我国约1/3的玉米受到镰刀菌及其DON、ZEN毒素的严重污染(王若军等,2003).2003年秋玉米收割前2个月,河南大部分地区延绵下雨,气温在10~20℃间,出现往年少有的高湿天气,这为镰刀菌和ZEN的污染提供了适宜的客观条件。ZEN对畜禽的毒副作用主要表现为雌激素中毒症,引起猪和牛的不孕或流产;在畜禽中,猪尤其是后备母猪对ZEN最为敏感,当饲料中含有1mg/kg以上的ZEN时就可以引起猪的雌激素中毒症。国外推荐母猪饲料中ZEN的最高允许含量为1mg/kg(陈必芳等,1995)(欧洲推荐的饲料最高含量标准为0.5mg/kg),我国ZEN的最高允许含量为0.1mg/kg.作者在饲料中观察到了镰刀菌,而且还检测出配合饲料中ZEN含量为1.85mg/kg,远远超过我国相关规定,也超过了国外的最高允许含量,证明郑州某猪场饲料中ZEN污染超标。本报告中病猪的症状与斯特劳等(2000)和曾芸等(1999)描述的症状相一致。2003年,河南农村不少猪场和专业户反映母猪繁殖障碍问题,曾认为是猪细小病毒病、蓝耳病、附红细胞体病等传染病所致,但防治效果不尽一致。由于传染性和非传染性因素均可引起繁殖障碍,本报告提示,有时应注意鉴别诊断霉菌毒素ZEN中毒引起的繁殖障碍。
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