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猪传染性疾病--附红细胞体的诊断

发布日期:2013年07月10日 来源:中国养猪网
 

(一)直接镜检

 

1.血样制备  采集该病原血样时,宜用柠檬酸盐作抗凝剂。若用EDTA作抗凝剂,易使其失去感染性。若用肝素作抗凝剂,易干扰其PCR检测。感染的细胞    [加入聚乙烯毗略烷酮(终极浓度为6.7%),可保留于液氮中。该病原为支原体,可用10010甘油/10%马血清于-700CF保留(Nonaka等,1996)Wright-Giemsa染色后,该病原为蓝紫色。叮睫橙染色可显示其单体。虫血症期间,作血涂片,用叮吮黄染色镜检,观察病原。

 

2.采血  将血样在水浴锅加热至38℃,制成血液抹片,经Giemsa染色,于油镜下观察。若有感染,可于红细胞附近中发现猪附红细胞体。因为该染色方法的色素会沉着在红细胞上,常被误以为是附红细胞体,还有一些红细胞的本身结构,如帕彭海姆体、Heinz氏小体、Howell-Jolly氏体常被误以为是附红细胞体,导致假阳性和误诊。有人以为目前误诊较严峻。

 

3.新鲜血液检查  取病猪耳静脉鲜血1滴置于载玻片上,加等量生理盐水混匀后盖上盖玻片,在400600倍暗视野显微镜下观察,可见球形、豆点状、杆状或颗粒状虫体或迅速置油镜下观察,可见红细胞内及血浆中有不规则雀斑状虫体,虫体在红细胞内较多,有的区域比较密集甚至成堆。因为虫体附着在红细胞表面有张力作用,使红细胞在视野内上下震惊或左右运动如同。一个附近嵌满蓝色发光珍珠的球体。红细胞边沿不整洁呈现菠萝状、锯齿状或不规则状。血浆呈半透明的波折状,虫体游离在血浆中,较活跃,能做舒展、旋转、翻滚等多方向运动。

 

4.血涂片染色检查  取病猪耳静脉血液进行涂片,烘干,滴上甲醇固定,晾干滴上姬姆萨染色液染色12h后冲刷晾干镜检。可见红细胞表面有很多圆钮形、卵形、杆状紫红色或粉红色的虫体,当调节微螺旋钮时,虫体折光性较强中心发亮,形似气泡。或滴上瑞氏染色液染色后,于600-1 000倍油镜下观察,发现红细胞表面附有多形态的虫体,蓝紫色红细胞边沿凸凹不平。如不能现场检查则采取经肝素或柠檬酸钠处理的抗凝血ImL,加10%福尔马林溶液ImL混匀  送实验室用、厂啶樺汍  n察,猪附红细胞体呈现由浅至深的枯黄色。

 

(二)动物试验

 

用可疑患附红体病的动物的血液接种健康实验动物小鼠、兔、鸡等)或鸡胚,接种后观察其表现并采血查附红细胞体。应用切除脾的健康猪进行人工感染试验,被以为是诊断本病的最确实方法,感染后3-20d,被感染猪表现急性发病,并可检到附红细胞体。此法费时较长,但有一定辅助诊。

 

血清学试验

 

用血清学方法不仅可诊断本病,还可进行流行病学调查和疾病监测,尤其是1986Lang等建立了将附红细胞体与红细胞分廾,用以制备抗原的方法以后,更加推动了血清学方法的发展,

 

(四分子生物学技术诊断

 

20世纪90年代开始有利用DNA探针技术和聚合酶链式反应( PCR)技术的报道。例如Oberst等在猪附红细胞体感染高峰期放血,分离猪附红细胞体,提取DNA,以,P标记制成探针,证实能区别猪附红体感染的猪和非感染猪,并且不与其他疾病感染猪的血清中的DNA发生杂交反应。后来他们又用PCR技术检查猪附红细胞体感染,证实其敏感性1:查出)lpgDNA,并证实猪被猪附红细胞体感染24h即可泛起PCR阳性。

 

鉴别诊断

 

I伤床上与猪瘟、弓形虫病、链球菌病和猪肺疫等疫病很相似,应留意鉴别诊断。

 

当前在发病猪群中附红细胞体病常与猪瘟、猪链球菌病、猪呼吸道病综合征、传染性肋膜肺炎、猪副嗜血杆菌病、圆环病主Ⅱ型感染耳病等混合感染或继发感染,在临床上症状表现为多样性与复杂性,诊断时需留意鉴别。

 


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