猪精液品控试验之精子形态学评估

     (1)整体形态

       对样本中精子的总体形态特征进行评估，并寻找异常精子。这种方法对于来自多头公猪的混合稀释精液尤为常用。利用显微镜在低倍(20X)物镜下观察精子的形态学特征，对正常和异常的精子细胞进行计数。用这种方法可以发现的异常包括头部异常、尾部异常、原生质滴，以及头部断裂。这种技术无法检测顶体、DNA、液泡等方面的形态学异常，要检测这些异常，需要高倍显微镜放大，并要求对细胞进行染色。

       整体形态学检测评估可利用某种CASA系统来完成，例如SpermVision

       (2)细微形态

       在亮视野显微镜下观察，精子细胞呈半透明状，因此要想进行细致、彻底的形态学检测评估，就需要采用特殊的显微技术或染色技术，尤其是怀疑受胎率受到了影响的情况下。湿片镜检时，在载玻片上滴一滴稀释精液，再滴上一小滴戊二醛来限制精子细胞的活动，然后加上盖玻片。对精子细微形态进行检查时，需要使用1000倍油镜，并结合采用特别的显微光学技术，例如相差显微或微分干涉差(DIC)显微(Barth和Ok0，1989)。

       精子细微形态学检查的另一个方法是，用稀释精液做成抹片，用伊红-苯胺黑染色，然后再用l000倍油镜在亮视野或相差显微镜上观察(图7)

       不论采用哪种方法，在形态学分类检查中都至少要对每个样本计数100个精子细胞。检查的分类项目取决于检查者所受过的培训，以及他／她进行这种检查的能力。总的说来，精子细微形态学检查的基本分类包括正常细胞、头部缺陷、尾部缺陷，以及原生质滴。不过，分类项目也可以扩展，包括顶体缺陷、头部断裂、中段缺陷、近端小滴、远端小滴、畸形细胞、存在其它细胞，等等。