猪人工授精技术是一项古老而成熟的繁殖技术,据传说,人工授精技术始于1322年,是一位阿拉伯人从敌营中盗取优秀战马的精液,但是科技文献记载,人工授精技术是1780年意大利的科学家司拜伦瑾尼(Spallanzani)用狗进行试验并取得了成功,俄国科学家伊凡诺夫于1899年开始将人工授精作为一项畜牧技术应用于马和牛等大家畜的实际生产中。猪人工授精技术应用研究主要开始于二战之后,现阶段广泛应用于养猪生产中,并且推广和普及的速度非常快,特别是在养猪生产水平比较高的国家及国际大型的猪育种公司(如PIC公司)。例如,美国1990年只有5%的繁育母猪采用人工授精,在2000年,人工授精技术的使用率达到60%,到了2007年,超过90%的繁殖母猪采用人工授精技术进行配种。
猪人工授精的工作流程,包括精液的采集,精液品质检测、稀释与分装、保存和运输,以及人工输精等技术环节,本文就在实际生产中,对猪人工授精的各个技术环节常遇到的问题进行讨论和分析,并提出相应的解决方法。但在具体讨论人工授精技术细节以前,先讨论精液的来源和配种制度。
1精液的来源和配种制度
采用人工授精技术,首先遇到两个问题,第一是精液的来源,从种公猪站购买或自己猪场制备?第二个问题是配种制度,也就是说全部采用人工授精,还是采用自然交配与人工授精相结合的配种方式?
精液的来源一般有两种,第一种是对自己猪场的公猪进行精液的采集制备,第二种是通过购买公猪站的优秀公猪生产的精液。精液的种类也有两种,第一种是一头公猪的精液,第二种是混精,也就是两头或两头以上公猪的精液混合制备而成的精液。若你的的猪场是繁殖猪场,生产的产品是商品猪,使用混精和优秀公猪精液均可,在一定的程度下,混精的效果可能还要更加优良些,若你的猪场是原种种猪场,生产的产品是种猪,此时就必须选择一头优秀公猪的精液,而且还要求公猪的系谱必须清楚,第二次输精还必须使用同一头公猪的精液。
配种制度,目前大多数猪场都采用两次配种的方式,实际应用人工授精技术进行配种时,可以选择两次都是人工授精的方式,也可以采用自然交配和人工授精相结合的方式,若你的猪场刚开始采用人工授精技术进行配种,建议采用自然交配与人工授精结合的配种方式,这样可以确保猪场的繁殖生产性能维持在相对较高的水平上。
2采精技术环节中常见的问题和解决的技术措施
猪精液的采集是猪人工授精的第一个技术环节,包括公猪的调教和采精两个技术环节。
2.1 公猪的调教
对于青年后备公猪调教,一般在7月龄开始,调教时间需要4~6周,在这个技术环节,特别注意:
(1)选择适宜的配种人员,因为配种是猪场的重要技术环节,关系到整个猪场的生产水平和生产性能,选择配种人员,首先应选择热爱该项工作的人员,此外还要求配种员有足够的耐心,能够与公猪建立良好的人猪关系,并建立相互的信任关系,即在调教的过程中不可粗暴对待公猪,更不可以殴打公猪。有些后备公猪在调教初期比较害羞,又没有相关的经验,若配种员态度温和,方法得当,调教时耐心对待调教公猪,并发出一种“亨亨”的叫声或抚摸公猪,调教工作就比较容易成功。
(2)在公猪的调教过程中,采取循序渐进的方法,如在调教工作中,可以先让刚开始调教的公猪进行观摩和学习,即让其在采精栏的旁边观看其他公猪的采精过程,这样有利于调教成功。
(3)对于比较难以调教的后备公猪,还可以使用发情母猪的尿液以及其他公猪的精液等涂抹在台畜上,必要时可以使用挡板,使调教公猪更加接近台畜,专注台畜,便于调教工作。
(4)每次调教的时间一般不超过15~20min,每天可训练一次,但一周最好不要少于3次,直至爬跨成功。调教成功后,连续3天,每天采精1次,希望建立公猪的条件反射,适应人工采精的状态。
2.2 精液的采集
公猪精液的采集最常用的方法是徒手采精法,虽然假阴道采精法有时也会使用。徒手采精法的优点是不需要太多的设备,操作简单易行,对于公猪的精液可以进行选择性采集,缺点是若操作不当,容易造成公猪阴茎的受伤,造成精液污染。
采精的过程一般包括以下环节:
(1)把公猪赶到采精栏舍,但是应该注意公猪到了采精栏舍以后有一个准备过程,先让其嗅、拱母猪台,采精人员可以抚摸公猪的阴部和腹部,以刺激其提高性欲。(2)采精员蹲于公猪一侧,待公猪阴茎伸出后,采精员用温暖清洁的手(戴有采精手套)抓住阴茎,握住螺旋头,由轻到重有节奏地紧握龟头螺旋部,并以适度压力,使公猪射精,另一手持集精杯接取公猪精液。
(3)集精瓶(杯)一般使用深色,容积600ml左右的广口容器,一般在集精瓶内部垫上一个塑料薄膜袋(或保鲜膜),集精瓶应该有保持37~38℃的双层套杯,中间充40~42℃温水即可保温,由于精子对温度,尤其是低温,十分敏感,防止精液突然降温引起不可逆的休克。精液采集完成以后,尽快送到精液品质检测和处理实验室,进行精子品质的检查和分装等下一步程序。
精液的采集,还应该注意几个问题:
(1)公猪射精时间约6~10min,出现2~4个射精波。第一次射精1~3min,射精量少约占5%~10%。开始射出的清亮液体部分应弃去不要,这部分液体是尿道球腺的分泌物,不含精子,用来冲洗尿生殖道的积尿,尿液对精子有害,因此开始射出的20ml不应接取。第二次射精约2~6min,射精量占总量的30%~50%,当射出乳白色的液体时,即为浓精液,就要用采精杯收集起来。第3~4次射精时间为3~8min,射精占总量的40%~60%;最后射出稀薄如水的液体,精子含量很少,含大量胶体物质也不必接取。
(2)采精时应固定人员。以免更换人员时,由于不良刺激导致采精失败。
(3)固定采精时间。为了建立公猪的固定条件反射,应该选择比较固定的时间进行采精。一般采精工作安排在上午,公猪在饲喂1~2h以后进行。
(4)合理的采精频率。青年公猪身体仍在继续发育,每周以采精1次为宜,一岁以上公猪每周采精2次,壮年公猪可二周采精5次。采精的频率主要依据每次射出精子总数和可利用的精子为标准(即精液质量),以保证精液的可贮存性和最高的采精力。
(5)采精人员在采精过程中应该注意安全。采精场地外围应设有高1.2m,相距约30cm的铁柱防护栏,人可侧身穿过,公猪则不能越过,避免公猪狂躁时伤人。
3精液的品质检测
公猪精液的品质检测是关系人工授精技术实施效果的重要技术环节,也是人工授精技术的优势之一,可以对精液质量进行完全的监测。精液品质的检测包括两项,即表观检测和设备检测。
3.1 精液的表观检测
猪精液的表观检测包括射精量、精液的颜色、气味以及pH值等项目。公猪的射精量一般为150~200ml,成年公猪的为200~300ml,有的高达700~800ml,精液量的多少因品种、品系、年龄、采精间隔、气候和饲养管理水平而不同。原精请勿转换盛放容器,以免导致较多的精子死亡。
正常精液的颜色为乳白色或灰白色,精子的密度愈大,颜色愈白。如果精液颜色有异常,则说明精液不纯或公猪有生殖道病变,如呈绿色或黄绿色时则可能混有化脓性的物质;呈淡红色时则混有血液;呈淡黄色时则可能混有尿液等。
正常的公猪精液含有公猪精液特有的微腥味。若有其他特殊臭味的精液可能精液被尿液或其它异物污染了。
对于精液的酸碱度,生产上通常可以不检测精液的pH值,若需要检测,可用pH试纸进行测定。
3.2 精液的设备检测
猪精液的设备检测,一般包括精子活力、密度以及畸形率的检测。
3.2.1 精子活力的检测
精子活力又叫精子活率,是指直线前进运动的精子占总精子的百分率。精子活力的高低关系到所配母猪受胎率和产仔数的高低,因此,每次采精后及使用精液前,都要进行活力的检查,以便确定精液能否使用及如何正确使用。
在我国精子活力一般采用10级制,即在显微镜下观察一个视野内的精子运动,若全部直线运动,则为1.0级;有90%的精子呈直线运动则活力为0.9;有80%的呈直线运动,则活力为0.8,依次类推。鲜精液的精子活率大于或等于0.7时才可使用,当活力低于0.6时,则应弃去不用。
评定精子活力时应注意:①取样要有代表性;②观察活率用的载玻片和盖玻片应事先放在37℃恒温板上预热,由于温度对精子影响较大,温度越高精子运动速度越快,温度越低精子运动速度越慢,因此观察活率时一定要预热载、盖玻片,尤其是从17℃精液保存箱的精子,应在恒温板上预热30~60s后观察;③观察活率时,应用盖玻片。否则,一是易污染显微镜的镜头,使之发霉;二是评定不客观,因为每次取样的量不同将影响活率的评定;④评定活率时,显微镜的放大倍数要求为100倍。因为如果放大过大,使视野中看到的精子数量少,评定不准确。
3.2.2 精子密度的测定
精子密度指每毫升精液中含有的精子数量,它是用来确定精液稀释倍数的重要依据。正常公猪的精子密度为2.0~3.0亿/ml,有的高达5.0亿个精子/ml,检测的方法可以人为进行估测,或通过显微镜进行检测,或通过分光光度计进行检测。建议有条件的猪场使用最后一种检测方法,因为它比较方便,检查所需时间短,重复性好,仪器使用寿命长。其基本原理是精子透光性差,精清透光性好。选定550nm,一束光透过10倍稀释的精液,光吸收度与精子的密度呈正比的关系,根据所测数据,查对照表可得出精子的密度。
3.2.3 畸型精子的检测
畸型精子指巨型精子、短小精子、断尾、断头、顶体脱落、有原生质、头大的、双头的、双尾、折尾等精子,一般不能直线运动,虽受精能力较差,但不影响精子的密度。精子畸形率是指畸形精子占总精子的百分率。若用普通显微镜观察畸形率,则需染色;若用相差显微镜,则不需染色可直接观察。公猪的畸形精子率一般不能超过20%,否则应弃去。采精公猪要求每2周检查一次畸形率。
畸形精子的检查过程:①取原精液少量,以3%氯化钠溶液进行10倍稀释;②以伊红或姬姆莎为染液,对精子进行染色;③400~600倍显微镜下观察精子形态,计算200个精子中畸形精子占的百分率。
4 精液的稀释与分装
4.1 精液的稀释
猪的精液如果不经过稀释,在体外保存的时间最多也就半小时,活力很快下降,而且很快失去受精能力。这是因为精清促进精子运动,缩短精子在体外的保存时间。精液的稀释就是以稀释液降低精子的密度,为精子提供营养、缓冲物质,并维持适当的渗透压和pH 值,以利于精子的保存。因此要求原精液应尽快稀释。
精液在稀释过程中应该注意:(1)等温稀释,就是说,在稀释时精液的温度与稀释液的温度应该尽量一致;(2)精子的稀释倍数,在稀释过程中,保证稀释后每头份的精液有足够的精子数,一般要求30~50亿,不过最新的研究结果表明每头份20亿精子,人工授精的效果也可以得到保证。
4.2 精液的分装
精液的分装方式,有瓶装、管装和袋装三种,装精液用的瓶、管和袋均为对精子无毒害作用的塑料制品。瓶装的精液分装时简单方便,易于操作,但输精时需人为瓶底开口,因瓶子有一定的固体形态;袋装的精液分装一般需要专门的精液分装机,用机械分装、封口,但输精时因其较软,一般不需人为挤压。一般上面均有刻度,瓶子最高刻度为100ml,袋子一般为80ml。
精液分装前先检查其活力,若无明显下降,按每头份80~100ml进行分装。分装后的精液,要逐个粘贴标签,一般一个品种一个颜色,便于区分。分好后将精液瓶加盖密封,封口时尽量排出瓶中空气,贴上标签,标明公猪的品种、耳号及采精日期与时间。需要保存的精液先在室温22~25℃下放置1~2h,或用几层干毛巾包好直接放在17℃(16~18℃)的精液保存箱中。
5 精液的保存与运输
5.1 精液的保存
猪精液保存温度常选择17℃(16~18℃),这是因为温度越高精子运动越快,保存时间越短;温度越低,精子运动速度越慢,保存时间越长。因此,温度越低保存效果越好。但是,当温度降至10℃以下时,精子将出现冷休克而死亡。
精液保存应该每天进行2次的摇动,每隔12h要摇匀一次精液,使得精子均匀悬浊于稀释液中,而能够获取充足的营养。
避免精液与水、酒精、汽油等物质接触,因为这些物质对精液都是有害的。避光保存,光线对于精子有害。
精液的储藏时间,一般要求3天以内,不能超过5天,在储藏时间内,温度保持在一个恒定的温度内,不能波动过大。
5.2 精液的运输
对于远距离购精液的猪场,运输过程是一个关键的环节。运输成败的关键在于保温和防震是否做得充分,保温或防震条件做得好的,即使运输距离较远,对精子活力影响也不明显,母猪受胎率和产仔数也会维持在较高的水平上,一般的操作是使用专用的储存的设备储存精液,温度要求也是17℃,运送的精液要尽快用于授精工作。
震动对精子活率影响不大,但是当精液与空气接触的震动,可引起精子的死亡,对授精效果影响较大。因此,在分装精液时,一定要尽量排空瓶中空气,降低空气对精子活率的影响。
6 猪的人工输精
猪人工输精是人工授精技术的最后技术环节,也是人工授精技术成败的关键技术环节。这个技术环节包括输精的适宜时间以及输精过程的技术。
6.1 适宜的输精时间
这个问题实际上是正确并准确对发情母猪进行鉴定,因为输精时间与母猪的发情周期密切相关。正确地判断母猪的发情状况,做到适时配种,是提高母猪受胎率和产仔数的关键。要求配种人员,对于母猪发情时的一些生理特征要非常了解,这对于发情鉴定非常重要。一般来说,发情母猪在行为和生理上较其他正常的母猪有明显的变化,例如发情期对公猪的接触、气味和声音都异常敏感,表现为典型的“静立反射”,即母猪压背时,站立不动、后肢绷紧、尾侧向一边、竖耳、耳尖外翻等症状。
每天进行两次发情鉴定,而且使用试情公猪进行发情检查的效果会更好一些,试情公猪一般选择行动缓慢、唾液分泌旺盛、善交谈的老龄公猪担任。
我们还必须注意以下问题:(1)人工授精的精子在母猪体内的存活时间为24h,而自然交配的精子在母猪生殖道中的存活时间约为36~42h。(2)大多数母猪的排卵时间是在母猪发情后36~48h,现在关键的问题是通过发情鉴定知道母猪准确的发情时间。(3)第一次输精时间(配种时间)是在排卵前6~8h,精子要预先到达指定地点,等待卵子的到来。(4)母猪的排卵集中在排卵的前1/3的时期,约为70%卵子。(5)输精时间与母猪的断奶与发情的间隔时间还有密切的关系,若断奶发情间隔时间长,6~7天,发现母猪的“静立反射”的发情征状,立刻进行第一次授精,12h后进行第二次配种;若母猪断奶发情间隔属于正常的5天,12h后进行第一次配种,12h后进行第二次配种;若母猪断奶发情间隔时间比较短,3~4天发情,最佳的配种时间应该在发情后24~36h,12~16h进行第二次配种,若发情的持续时间特别长,可以选择第三次配种。
6.2 输精过程需要注意的技术环节
(1)将试情公猪赶至待配母猪栏前,使母猪在输精时与公猪有口鼻接触,要求公猪在走道相对固定,不要走动。输精栏后部不应有横向的水管或固定物,否则,影响按摩刺激的效果。
(2)输精管的插入,一般应该到达子宫颈,让子宫颈紧紧的固定住输精管,将会感到输精管被锁定。在该技术环节,应该注意以下细节:可以在输精管的端部,使用少量的润滑剂或少许的精液、稀释液,有利于输精管的顺利导入;在导入输精管时,一般采用逆时针的方法,缓慢导入;插入输精管,一般是在开始阶段,输精管应该稍稍向上的角度插入,以避免输精管与膀胱接触,若在实际的操作中发生了此类错误,请更换输精管,因为尿液对精子非常不利。
(3)人工授精时,应该尽量模拟自然交配的状态,比如配种人员可以反坐在母猪的后驱,或者对母猪的腹部进行适当的刺激,母猪阴户或肋部进行按摩,肋部的按摩更能增加母猪的性欲。输精人员倒骑在母猪背上,并进行按摩,效果也很理想。
(4)控制输精的时间和速度,正常的输精时间应和自然交配一样,一般为5~10min,时间太短,不利于精液的吸纳,太长则不利于工作的进行。实际中可以通过控制输精瓶高低,或给予输精的精液袋以适当的压力等措施,调节输精时间。
(5)在输精的过程中,少许精液的回流溢出是允许的,但是回流溢出量比较大时,就应该稍微调节一下输精管的位置,若还没有改观,就应该停止输精过程。
(6)输精完成以后,应该以顺时针的方向取出输精管,然后让母猪保持安静状态20~30min,这样有利于精子在母猪体内的运动和受精过程,从而获得较好的配种效果。
7 结束语
猪的人工授精是现代养猪生产常用的技术,使用合理可以大大提高猪场的经济效益和生产水平,当然人工授精技术应用的效果,受到许多因素的影响,我们要在不断的实践中进行总结,提高人工授精技术的实际操作水平,让人工授精技术更好的为猪场和养猪生产服务。