一、发病情况及症状
2008年6月中旬,河南省新安县某猪场共存栏生猪135头,6月8日有3头50日龄仔猪发病,一周后波及全群,病猪体温41~42℃,食欲不振或废绝,咳嗽,呼吸困难,可视黏膜发绀,背部毛孔有出血点,仔猪胸、耳后、腹部的皮肤发红,尤其是耳后部出现紫红色斑块,母猪阴部水肿,尿液呈黄色或红色,个别猪出现关节炎症状。初步诊断为猪附红细胞体病和副猪嗜血杆菌混合感染,用磺胺间甲氧嘧啶、长效土霉素进行治疗, 5天后,症状减轻,但停药后又出现反复,少部分病猪出现腹泻。
二、病理变化
剖检病危猪3头,可见皮肤黄染且有大小不等的紫色出血或出血斑,脂肪黄染,四肢末梢、耳尖及腹下出现大面积紫色斑块。血液稀薄,颜色变淡,凝固不良;全身淋巴结肿大,质地柔软,切面有灰白色坏死灶或出血斑。胸腔内有大量的淡红色液体和纤维素性渗出物凝块,浆膜面上有浆液性和化脓性纤维蛋白渗出物;心外膜与心脏粘连在一起,心肌有出血点,心包腔积有淡红色液体。肺脏肿胀、出血、瘀血;肝脏肿大,呈黄棕色,脾脏肿大,变软,边缘有点状出血;胆囊内充满浓稠的胆汁。在肾脏切面上可以看到灰白色、半透明颗粒状隆起的肾小球,表现为肾小球肾炎。肠道的病变主要是回肠末端,回盲瓣、盲肠和结肠黏膜上发生局灶性病变――轮层状扣状肿。其中一头猪的腕关节和跗关节高度肿大,有波动感,关节腔内有红色渗出液。
三、实验室诊断
血液压片镜检 从猪耳静脉采血1滴加等量生理盐水混匀后,加盖玻片,在400~600倍显微镜下检查,可见附着在红细胞表面或游离于血浆中的附红细胞体呈球形、逗点形、杆状或颗粒状。血浆中的虫体可做伸展、收缩、转体等运动。在油镜下可见红细胞的形态发生了变化,呈菠萝状、锯齿状、星状等不规则形态。
血液涂片检查 取血液涂片,进行姬姆萨氏染色,在油镜下观察,可见紫红色或粉红色的虫体,附着虫体的红细胞上下震颤或左右运动,可确定为附红细胞体感染。
涂片镜检 取包膜渗出物、关节腔渗出物、肺等涂片,革兰氏染色,镜检,可见到革兰氏阴性的细小杆菌。菌体形态表现明显的多形性,以纤细杆状者居多,个别呈两极浓染的球杆状或长而弯曲的丝状菌体,无鞭毛,无芽孢,新分离的致病菌株有荚膜。
分离培养 取扑杀病猪的胸腔液、心包液、心血、肺脏接种于鲜血琼脂培养基和5%兔脱纤维血巧克力琼脂培养基平面(80℃下作用30分钟,含V因子),置37℃恒温箱中培养24小时后观察。
结果:鲜血琼脂培养基中未见细菌生长,巧克力琼脂培养基平面上有细小菌落生长。继续培养到48小时后,可见平面上有圆形、隆起、表面光滑、边缘整齐、灰白色半透明的小菌落,生长良好,且不表现溶血现象。
培养特性试验 将分离的菌接种于巧克力琼脂平皿,纯化增菌培养后,在兔鲜血平皿上均匀涂布接种纯化菌,并做两条平行划线状接种金黄色葡萄球菌,置37℃恒温箱中培养24~48小时,观察细菌生长情况。48小时后发现离金黄色葡萄球菌越近菌落越大,越远则越细小,直到不生长,呈现出明显的“卫星现象”。综合判断为副猪嗜血杆菌感染。
免疫荧光试验 采早期病猪的扁桃体和淋巴结,或采晚期病猪的脾和肾组织,做冰冻切片,丙酮固定后,用猪瘟荧光抗体染色检查,2~3小时见扁桃体隐窝上皮细胞或肾曲小管上皮细胞浆内呈现明亮的黄绿色荧光,判为猪瘟病毒感染阳性。
化学呈色反应 取洗净的肾脏捣碎,加入90%乙醇100毫升,浸泡20分钟,取滤液放入小平瓷盘内,置38℃恒温箱中,待干燥后从盘边缘加浓硝酸数滴,出现淡紫红色,综合判断为猪瘟。
根据发病情况、临床症状和实验室检查,诊断为附红细胞体、猪瘟和副猪嗜血杆菌混感。
四、防制措施
(一)预防措施
1.搞好防疫
猪瘟病:规模化猪场在免疫前,应对猪群进行抗体水平检测,依照猪群的不同抗体水平情况,制定出相应的免疫程序,才能获得良好的免疫效果。目前多采用在新生仔猪吃乳前注射2倍剂量的猪瘟脾淋苗,待1.5小时后再吃初乳,仔猪50日龄时再加强免疫一次。同时定期对猪群进行疫病监测,及时淘汰带毒猪。引种时要加强检疫,防止引入病猪,切断传播途径。
副猪嗜血杆菌病:用副猪嗜血杆菌多价苗进行免疫,母猪于初产前40天一免,产前20天二免;经产母猪产前30天免疫1次即可。受该病严重威胁的猪场,小猪也要进行免疫,仔猪免疫一般在7日龄到30日龄内进行,每次1毫升,最好一免过后15天再重复免疫1次,二免距发病时间要有10天以上间隔。此外,免疫的同时最好结合药物预防,能达到标本兼治的功效。
2.消除诱因
加强猪场饲养管理与环境消毒,在猪群断奶、转群、混群或运输前后,也可在饮水中加一些抗应激的药物,如维生素C、免疫金(黄芪、党参、杜仲、葛根等),以增强机体抵抗力。
(二)防制方案
大剂量注射猪瘟弱毒疫苗每头猪25头份或猪瘟脾淋苗10头份可获得一定疗效;
贝尼尔8毫克/千克体重,用蒸馏水稀释后1次分点深部肌肉注射,重症者1天1次,连用5天;或长效土霉素肌内注射,每天1次,连用3天,或复方三氮脒0.2毫升/千克体重,连用3天;
蓝易清(氟苯尼考)0.1毫升/千克体重,肌肉注射,每天一次,连用3天;
对贫血严重的猪群补注铁制剂、维生素C、维生素B12和肌苷,可有效提高病猪的抵抗力;
对食欲不振或废绝者可补饮电解多维和口服补液盐或肌注复方黄连素和复合维生素B注射液,每天一次,连用3天。
副猪嗜血杆菌有多种血清型,不同血清型对同一种抗生素的敏感性有很大差异;另外,临床上滥用抗生素会造成耐药性增加,因此,应用抗生素治疗时,最好通过药敏试验选择敏感的抗生素。